大鼠Ⅱ型肺泡細(xì)胞表面抗原 （ELISA）試劑盒

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。

利用

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標(biāo)記。固相載體表面結(jié)合的抗原或抗體仍保留其免疫活性，而酶標(biāo)抗原或抗體同時保留其免疫活性和酶活性。在測量過程中，測試樣品（其中的抗體或抗原）與固體支持物表面的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)。在固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物通過洗滌與液體中的其他物質(zhì)分離。然后加入酶標(biāo)抗原或抗體，也通過反應(yīng)與固相載體結(jié)合。此時，固相上酶的量與樣品中被測物質(zhì)的量成正比。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的多少與樣品中被測物質(zhì)的多少直接相關(guān)，因此可以進(jìn)行定性或定量分析根據(jù)顏色深度。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，并且該測定方法達(dá)到了高靈敏度。 ELISA 可用于測量抗原和抗體。

怎么做

雙抗體夾心法

1. 包被：以 0.05MPH 稀釋抗體至蛋白質(zhì)含量為 1-10 μg/ml。 9. 含氧碳酸鹽涂層緩沖液。向每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加入 0.1 ml，并在 4 °C 下孵育過夜。次日，棄孔中的溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，每次3分鐘。 （簡稱洗滌，下同）。

2、加樣：將0.1ml稀釋后的待測樣品加入上述包被的反應(yīng)孔中，37℃孵育1小時。然后洗。 （同時制作空白孔、陰性對照孔和陽性對照孔）。

3、加入酶標(biāo)抗體：在每個反應(yīng)孔中加入0.1ml新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（滴定后稀釋）。在 37°C 下孵育 0.5 至 1 小時并洗滌。

4 加入底物顯色液：在每個反應(yīng)孔中加入 0.1 ml 臨時配制的 TMB 底物溶液，37°C 孵育 10-30 分鐘。

5. 反應(yīng)終止：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸。

6、結(jié)果判斷：在白色背景下，肉眼可直接觀察結(jié)果：反應(yīng)孔顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)無色或極淺。 “-"符號表示。 OD值也可以測量：在ELISA檢測器上，在450nm（ABTS顯色時為410nm），用空白對照孔調(diào)零后測量各孔OD值，如果大于2.1倍陰性對照的OD值，即陽性。

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