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ELISA試劑盒操作步驟知多少?

發(fā)布時(shí)間: 2023-06-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1035次
  操作步驟
  (一)樣品準(zhǔn)備
  1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
  2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋(如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
  3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
 ?。ǘz驗(yàn)方法
  1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
  2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
  3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
  4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
  5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
  6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
  7.洗滌,同步驟5。
  8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
  9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。
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